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細胞復蘇的小Tips

一、細胞復蘇的原理細胞復蘇的原理是基于將細胞從液氮或-80℃冰箱中快速取出并使其恢復活力的技術。遵循“快融”原則，短時間內融化胞外結晶，避免緩慢融化導致水分滲入胞內形成胞內再結晶損傷細胞，融化越快，細胞損傷越小。二、細胞復蘇的小Tips1.為防止凍存管在水浴鍋中升溫時突然爆炸，可以在放入水浴鍋前先在生物安全柜中把蓋子擰松一下然后再擰上。2.從液氮罐里拿出細胞不必急于放入水浴鍋中，因為細胞從液氮的-196℃上升到-80℃這個過程對細胞是沒有損害的，我們有足夠的時間處理。但是，一...

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免疫組化（IHC）SP法，原來如此簡單！

免疫組化，是應用免疫學基本原理-抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及相對定量的研究，稱為免疫組織化學技術或免疫細胞化學技術。一、SP法步驟1.SP三步法脫蠟→梯度水化→滅活內源性過氧化物酶→抗原修復→封閉→一抗孵育→二抗孵育→SP反應→DAB顯色→蘇木素復染→常規(guī)脫水→透明→封片2、免疫組化的關鍵環(huán)節(jié)①脫蠟和水化②抗原修復③滅活內源性過氧化物酶和...

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WB-考馬斯亮藍染色法

一、考馬斯亮藍結構考馬斯亮藍R-250和G-250染料是二磺酸化三苯基甲烷化合物的兩種化學形式，結構上R-250比G-250少了2個甲基。二、蛋白質染料要求用染料和生物大分子結合形成有色的復合物是電泳后檢測常用的方法。選用染料通常應考慮以下要求：1.必須與大分子結合以形成一個不溶性的，有色的，緊密的復合物，但不結合到凝膠中和支持膜上，以便從凝膠中除去，否則高背景會影響蛋白帶的辨別和定量掃描。2.染料必須容易溶解在對大分子沒有影響的溶劑中，以利于背景的脫色。3.選用高吸光系數(shù)的...

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細胞凍存的小Tips

細胞凍存是細胞培養(yǎng)中的關鍵環(huán)節(jié)，直接影響細胞存活率和活力，關系到后續(xù)細胞實驗能否按照計劃有效地進行。掌握好細胞凍存的小Tips，有助您做好細胞培養(yǎng)式樣，讓我們一起來看看吧！一、細胞凍存的基本原則細胞凍存遵循“慢凍”原則：讓細胞在超低溫環(huán)境中緩慢進入“冬眠”狀態(tài)，暫時停止其代謝活動。目的是保存細胞樣本，方便復蘇。二、細胞凍存的注意事項1.溫度控制不穩(wěn)定可能導致細胞存活率降低二甲基亞砜（DMSO）或甘油常作為冷凍保護劑，保護細胞。DMSO能快速穿透細胞膜進入細胞，降低冰點，延緩凍...

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Elisa試劑盒怎么選？

在選擇ELISA試劑盒時，不同的用戶往往有不同的選擇標準，無論是靈敏度、樣本類型還是簡便性，核心標準是ELISA試劑盒的重現(xiàn)性。一、試劑盒的應用種屬、檢測樣本的種類一般來說，生產廠家都會在產品名稱上標明種屬，ELISA試劑盒種屬:人、小鼠、大鼠、兔、猴等。待檢樣本種類：體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿等。二、試劑盒的檢測范圍就是標準曲線范圍，特別要注意待測樣本濃度是否落在標準曲線范圍內，對于高濃度樣本，需要先進行預實驗摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測定樣本。三...

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